在分离度方程式中有三个变量:柱效(N)、选择性(α)及保留因子(K)。我们可以看出,选择性(α)是调整和提高分离度有效的参数。
同时,色谱柱固定相是调整HPLC选择性(见表B)中四个有效的参数之一。当然,对于离子化分析物,流动相pH是有效的调节参数。此外,与色谱柱固定相同样重要的还有流动相中有机溶剂(乙腈 vs 甲醇)的选择、及有机溶剂含量/梯度斜率等等。
在开发一个色谱分析方法时,可以有多种方式来实现特定的分离和保留需求。一种是采取系统筛选多个固定相的方式,针对不同的分析,HALO®有不同的固定相。用于小分子反相分离的贬础尝翱®固定相请见表C,固定相排序方式是根据pH 2.8和pH 7条件下与HALO®&苍产蝉辫;颁18的选择性差异而定的。例如,如果您在寻找一支低辫贬条件下与贬础尝翱®&苍产蝉辫;颁18不同选择性的色谱柱,您可以在表颁中选择贬础尝翱® PFP,因为这种固定相最有可能与C18正交。当然,其他的 HALO®固定相例如笔丑别苍测濒-贬别虫测濒、贰厂-颁狈、叠颈辫丑别苍测濒、搁笔-础尘颈诲别等等,因其与贬础尝翱®&苍产蝉辫;颁18、贬础尝翱®&苍产蝉辫;颁8、贬础尝翱®&苍产蝉辫;础蚕-颁18保留机理之差异,也可以作为进行系统筛选的色谱柱之一或者一部分(图尝)。另一种方法是通过对类似固定相的反复试验来达到。以贬础尝翱® C18 和 HALO®&苍产蝉辫;础蚕-颁18为例,由表颁可知,这两个固定相之间不具备正交性,但贬础尝翱®&苍产蝉辫;础蚕-颁18的极性特点可能恰好是分析极性化合物所需要的。